化學(xué)發(fā)光定氮儀的化學(xué)發(fā)光技術(shù)解析
點(diǎn)擊次數(shù)：2382 更新時(shí)間：2019-10-28
電化學(xué)發(fā)光是通過(guò)對(duì)電極施加一定的電壓進(jìn)行電化學(xué)反應(yīng)而發(fā)光，通過(guò)測(cè)量化學(xué)發(fā)光光譜和強(qiáng)度來(lái)測(cè)定物質(zhì)含量的一種痕量分析方法。它將電分析化學(xué)手段和化學(xué)發(fā)光方法相結(jié)合，具有*的優(yōu)點(diǎn)，如重現(xiàn)性和靈敏度進(jìn)一步提高，在多種組份同時(shí)存在時(shí)，可施加不同波形、不同電壓的信號(hào)進(jìn)行選擇性測(cè)量等，是潛在的分析手段之一。
化學(xué)發(fā)光免疫分析是以標(biāo)記發(fā)光劑為示蹤物信號(hào)建立起來(lái)的一種非放射標(biāo)記免疫分析法，具有靈敏度高、線性范圍寬、儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、分析速度快和容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)。魯米諾、異魯米諾及其衍生物、吖啶酯衍生物、辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶是目前化學(xué)發(fā)光免疫分析中使用多的標(biāo)記物。
微粒子化學(xué)發(fā)光是化學(xué)發(fā)光免疫分析的特殊形式，是以化學(xué)發(fā)光劑為底物的酶免疫技術(shù)，同時(shí)應(yīng)用了磁性微珠做固相載體，增加了吸附面積，使抗原抗體大限度的結(jié)合。以3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4- (3-磷氧酰)．苯基．1，2一二氧環(huán)乙烷(AMPPD)為發(fā)光底物在堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)的作用下，迅速去磷酸酶，生成不穩(wěn)定的中介體AMPPD-，進(jìn)而產(chǎn)生激發(fā)態(tài)產(chǎn)物，當(dāng)其躍遷回到基態(tài)時(shí)產(chǎn)生光子。微粒子化學(xué)發(fā)光技術(shù)所需標(biāo)本量極少，孵育時(shí)間大大縮減，同時(shí)因其選擇性吸附抗原，從而提高了特異性、靈敏性，使測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，并減少污染。
化學(xué)發(fā)光生物傳感器是通過(guò)非創(chuàng)傷或非損傷性的辦法，連續(xù)、實(shí)時(shí)、動(dòng)態(tài)地檢測(cè)生物體內(nèi)的某一種或幾種物質(zhì)濃度的技術(shù)。該技術(shù)以化學(xué)發(fā)光作為換能器，不但繼承了化學(xué)發(fā)光高靈敏度的優(yōu)點(diǎn)，而且大大提高了化學(xué)發(fā)光的選擇性。按照所固定化的生物組分的種類，可以將化學(xué)發(fā)光生物傳感器分為酶?jìng)鞲衅鳌⒚庖邆鞲衅鳌⒔M織傳感器、核酸傳感器及微生物傳感器等。特別是化學(xué)發(fā)光免疫傳感器是將具有分子識(shí)別作用的抗原或抗體以適當(dāng)?shù)姆绞焦潭ɑ瞥桑Y(jié)合了化學(xué)發(fā)光高靈敏度和抗原抗體特異性結(jié)合的高度專一性以及無(wú)污染等特點(diǎn)，是替代放射免疫分析的重要分析工具，已日益受到重視。
化學(xué)發(fā)光核酸探針已用于檢查病毒、細(xì)菌和原蟲(chóng)的DNA。以魯米諾增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)體系的核酸探針主要有兩種形式，一種是用生物素標(biāo)記探針，雜交后經(jīng)過(guò)分離，再以過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素與生物素結(jié)合，加入魯米諾和增強(qiáng)劑后測(cè)發(fā)光。另一種是以過(guò)氧化物酶直接標(biāo)記探針，用增強(qiáng)的魯米諾檢測(cè)發(fā)光。核酸探針亦可用吖啶酯或AP來(lái)標(biāo)記，吖啶類發(fā)光體系發(fā)出的是瞬時(shí)光，而AP以AMPPD作為發(fā)光底物，其發(fā)光體系具有發(fā)光持續(xù)穩(wěn)定的特點(diǎn)，發(fā)光時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)幾天，既可用發(fā)光儀也能用簡(jiǎn)單的感光膠片檢測(cè)。另外，AP-AMPPD發(fā)光體系具有非常高的靈敏度，無(wú)論是固相還是液相檢測(cè)，對(duì)標(biāo)記物堿性磷酸酶的檢測(cè)限可達(dá)10-21(<1000 AP分子)，是目前靈敏的核酸測(cè)定方法之一，已用于檢測(cè)B19微小病毒DNA、人乳頭瘤病毒DNA(HPV)．巨細(xì)胞病毒DNA(CMV)，并在DNA測(cè)序中有很好的應(yīng)用。
化學(xué)發(fā)光免疫分析是以標(biāo)記發(fā)光劑為示蹤物信號(hào)建立起來(lái)的一種非放射標(biāo)記免疫分析法，具有靈敏度高、線性范圍寬、儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、分析速度快和容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)。魯米諾、異魯米諾及其衍生物、吖啶酯衍生物、辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶是目前化學(xué)發(fā)光免疫分析中使用多的標(biāo)記物。
微粒子化學(xué)發(fā)光是化學(xué)發(fā)光免疫分析的特殊形式，是以化學(xué)發(fā)光劑為底物的酶免疫技術(shù)，同時(shí)應(yīng)用了磁性微珠做固相載體，增加了吸附面積，使抗原抗體大限度的結(jié)合。以3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4- (3-磷氧酰)．苯基．1，2一二氧環(huán)乙烷(AMPPD)為發(fā)光底物在堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)的作用下，迅速去磷酸酶，生成不穩(wěn)定的中介體AMPPD-，進(jìn)而產(chǎn)生激發(fā)態(tài)產(chǎn)物，當(dāng)其躍遷回到基態(tài)時(shí)產(chǎn)生光子。微粒子化學(xué)發(fā)光技術(shù)所需標(biāo)本量極少，孵育時(shí)間大大縮減，同時(shí)因其選擇性吸附抗原，從而提高了特異性、靈敏性，使測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，并減少污染。
化學(xué)發(fā)光生物傳感器是通過(guò)非創(chuàng)傷或非損傷性的辦法，連續(xù)、實(shí)時(shí)、動(dòng)態(tài)地檢測(cè)生物體內(nèi)的某一種或幾種物質(zhì)濃度的技術(shù)。該技術(shù)以化學(xué)發(fā)光作為換能器，不但繼承了化學(xué)發(fā)光高靈敏度的優(yōu)點(diǎn)，而且大大提高了化學(xué)發(fā)光的選擇性。按照所固定化的生物組分的種類，可以將化學(xué)發(fā)光生物傳感器分為酶?jìng)鞲衅鳌⒚庖邆鞲衅鳌⒔M織傳感器、核酸傳感器及微生物傳感器等。特別是化學(xué)發(fā)光免疫傳感器是將具有分子識(shí)別作用的抗原或抗體以適當(dāng)?shù)姆绞焦潭ɑ瞥桑Y(jié)合了化學(xué)發(fā)光高靈敏度和抗原抗體特異性結(jié)合的高度專一性以及無(wú)污染等特點(diǎn)，是替代放射免疫分析的重要分析工具，已日益受到重視。
化學(xué)發(fā)光核酸探針已用于檢查病毒、細(xì)菌和原蟲(chóng)的DNA。以魯米諾增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)體系的核酸探針主要有兩種形式，一種是用生物素標(biāo)記探針，雜交后經(jīng)過(guò)分離，再以過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素與生物素結(jié)合，加入魯米諾和增強(qiáng)劑后測(cè)發(fā)光。另一種是以過(guò)氧化物酶直接標(biāo)記探針，用增強(qiáng)的魯米諾檢測(cè)發(fā)光。核酸探針亦可用吖啶酯或AP來(lái)標(biāo)記，吖啶類發(fā)光體系發(fā)出的是瞬時(shí)光，而AP以AMPPD作為發(fā)光底物，其發(fā)光體系具有發(fā)光持續(xù)穩(wěn)定的特點(diǎn)，發(fā)光時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)幾天，既可用發(fā)光儀也能用簡(jiǎn)單的感光膠片檢測(cè)。另外，AP-AMPPD發(fā)光體系具有非常高的靈敏度，無(wú)論是固相還是液相檢測(cè)，對(duì)標(biāo)記物堿性磷酸酶的檢測(cè)限可達(dá)10-21(<1000 AP分子)，是目前靈敏的核酸測(cè)定方法之一，已用于檢測(cè)B19微小病毒DNA、人乳頭瘤病毒DNA(HPV)．巨細(xì)胞病毒DNA(CMV)，并在DNA測(cè)序中有很好的應(yīng)用。